Биолюминесцентный экспресс-метод оценки антибиотикочувствительности возбудителя

Быстрый скрининг чувствительности микроорганизмов к антибиотикам представляет большой практический интерес для рациональной химиотерапии гнойно-воспалительных заболеваний и послеоперационный осложнений микробной этиологии. Микробиологические методы оценки антибиотикочувствительности возбудителя (диско-диффузионный метод (ДЦМ) и метод серийных разведений (МСР)) продолжительны по времени (от 18—36 и более часов) и трудоёмки. В основу использованного метода положено измерение биолюминесценции (свечения), возникающей при взаимодействии аденозин-5-трифосфата (АТФ) с АТФ-реагентом (готовой реакционной смесью, содержащей фермент — люциферазу светляков и люциферин). Интенсивность биолюминесценции пропорциональна концентрации АТФ в реакционной смеси, которая, в свою очередь, пропорциональна титру жизнеспособных микробных клеток в анализируемом образце. При проведении анализа сравнивали интенсивность биолюминесценции в аликвотах микробной суспензии, содержащих исследуемые антибиотики (проба) и без антибиотика (контроль) через 5 ч инкубирования и рассчтывали коэффициент подавления роста микробных клеток под действием антибиотика. Предложены критерии оценки антибиотикочувствительности возбудителя биолюминесцентным методом. Результаты оценки антибиотикочувствительности возбудителя, полученные предложенным методом и ДЦМ, либо МСР, хорошо совпадали (коэффициент корреляции более 88%).

АТФ, интенсивность биолюминесценции, люцифераза светляков, антибиотики, антибиотикочувствительность возбудителя, химиотерапия

1. Егоров Н. С. Основы учения об антибиотиках. Антибиотики. М., 1986.

2. Lalita M. K. Manual on Antimicrobial Susceptibility Testing. Department of Microbiology, Christian Medical College, Vellore, Tamil Nadu 2007 Sept.

3. Угарова H. H. Биоаналитические применения люциферазы светляков. Прикл биохим микробиол 1993; 29: 2: 180—192.

4. Sala-Newby G. B, Goodfield C., Johnson I. R. Ultra-sensitive detection of microbes by ATP analysis. In: ATP Luminescence: Society for the Applied Bacteriology 1989: 261—69.

5. Угарова H. H., Малошенок Л. Г., Мороз Н. А., Ломакина Г. Ю. Реагент для определения аденозин-5 -трифосфата. Патент на изобретение № 2268943. 2004.

6. Титов А. И., Романова Н. А., Данилова Т. М. и др. Биолюминесцентный метод определения чувствительности микрофлоры к антибиотикам. Лаб дело 1990; 10: 61—66.

7. Inavcic V., Mastali M., Percy N. et al. Rapid antimicrobial susceptibility determination of uropathogenes in clinical specimens by use of ATP bioluminescence. J Clin Microbiol 2008; 4: 46: 1213—1219.