Валидационные процедуры для определения показателя «Бактериальные эндотоксины»

Применение ЛАЛ-теста, в качестве метода определения бактериальных эндотоксинов (БЭ), позволяет нормировать содержание примесей, вызывающих пирогенную реакцию у пациентов. Повышению надёжности и воспроизводимости этого метода способствуют валидационные процедуры, которые являются неотъемлемой частью методик определения БЭ и основаны на построении «модельного опыта», где сравнивают испытуемые и контрольные образцы. В зависимости от методики испытаний (гель-тромб или фотометрические тесты) на наличие БЭ применяют соответствующие валидационные процедуры с оценкой необходимых параметров. Цель данной работы - доказать с помощью валидационных процедур возможность взаимозаменяемости методов определения БЭ на примере препарата «Цефтриаксон, порошок для приготовления раствора для внутримышечного введения 500 мг». Методики исследования: Гель-тромб и хромогенный кинетический тесты. Результаты проведенных испытаний подтверждают воспроизводимость и специфичность методик ЛАЛ-теста. Чувствительность используемого ЛАЛ-реактива подтверждена. В опытах гель-тромб теста для препарата «Цефтриаксон» валидировано разведение 1:160 основного раствора в концентрации 100 мг/мл. Параметры калибровочной кривой в кинетическом хромогенном опыте соответствовали валидационным требованиям (CV<10% и r>0,98). Определение содержания бактериальных эндотоксинов в лекарственном препарате «Цефтриаксон» фотометрическим методом возможно в том же разведении 1:160, где точность определения БЭ в испытуемом образце CV<20%, степень извлечения добавленного эндотоксина равна 108%. Выводы. Проведённые исследования на примере лекарственного препарата «Цефтриаксон» доказали возможность взаимозаменяемости методик определения БЭ, что подтверждено необходимыми валидационными процедурами.

бактериальные эндотоксины, ЛАЛ-(лизат амёбоцитов люмулюс)-тест, метод гель-тромб, кинетический хромогенный метод, валидация, мешающие факторы

1. Долгова Г.В., Неугодова Н.П., Шаповалова О.В., Сапожникова Г.А., Аладышева Ж.И Определение бактериальных эндотоксинов в фармацевтических субстанциях, используемых для изготовления инфузионных растворов. Ведомости Научного центра экспертизы средств медицинского применения. 2006; 2: 67-74

2. Шаповалова О.В., Неугодова Н.П., Долгова Г.В., Сапожникова Г.А. Методические подходы к разработке показателя «Бактериальные эндотоксины» в фармацевтических субстанциях. Ведомости Научного центра экспертизы средств медицинского применения. 2012; 3: 47-50

3. Государственная фармакопея Российской Федерации XIII изд., «Бактериальные эндотоксины» ОФС. 1.2.4.0006.15

4. Guideline on Validation of the Limulus Amebocyte Lysate Test as an End-Product Endotoxin Test for Human and Animal Parenteral Drugs, Biological Products, and Medical Devices, 1987; 54.

5. Rustichelli D., Castiglia S., Gunetti M., Mareschi K., Signorino E., Muraro M., Castello L., Sanavio F., Leone M., Ferrero I., Fagioli F. Validation of analytical methods in compliance with good manufacturing practice: a practical approach. Journal of Translational Medicine, 2013; 2-13.

6. Sandle T. Variability and Test Error with the LAL Assay. Search American Pharmaceutical Review, 2014; 17(6): 22-28.

7. Guimaräes R.C., Xavier A. A. et al. Analytical Validation of LAL Kinetic Assay for Detection and Quantification of Endotoxins in Measles's Vaccine Diluents. International Journal Brazilian archives of biology and technology, 2006; Vol. 49: 59-64.

8. Richardson K., Novitsky T.J. Simple Statistics for the LAL User - Standard Deviation, Repeatability, Reproducibility and a Clarification of the Coefficient of Variation. LAL Update, 2002; Vol. 20, No. 4: 6.

9. Jonathan Wong, Nathan Davies, Hasan Jeraj, Enric Vilar, Adie Viljoen, Ken Farrington. A comparative study of blood endotoxin detection in haemodialysis patients, Journal of inflammation; 2016.

10. Syed Imtiaz Haider Validation Standard Operating Procedures: A Step by Step Guide for Achieving Compliance in the Pharmaceutical, Medical Device, and Biotech Industries, 2006; 445-965.

11. Sandle T. Performance Characteristics Of Automated LAL Tests. Pharmaceutical Microbiology Interest Group News 4, 2001; 3 - 6.

12. Hurley J.C., Tosolini F.A., Louis W.J. Quantitative Limulus lysate assay for endotoxin and the effect of plasma. J. Clin. Pathol, 1991; 44 (10): 849-854.

13. Nagarajan K., Chitnis P. K. Part II: Enhancement». BET Newsletter A Charles River Private Limited Communication, 2010; volume 1, Issue 5: 5.