Характеристика взаимодействия специфических антител с Pgp в клетках Т-лимфобластного лейкоза линии Jurkat

Изучены методические особенности оценки экспрессии Pgp методом проточной цигофлуориметрии. В культуре клеток Т-лимфобластного лейкоза человека линии Jurkat проанализирован характер взаимодействия моноклональных (клон17F9) антител Becton Dickinson Pharmingen к внешнему эпитопу Pgp, меченных FITC, в зависимости от концентрации исследуемых клеток (от 400 тыс. до 3 млн клеток в мл) и концентрации специфических антител (5, 10 и 20 мкл раствора коммерческого препарата на 300 мкл клеточной суспензии). Результаты. 1. Оптимальное условие инкубации с антителами - после фиксации клеток 4% раствором формальдегида. 2. Характер увеличения средней интенсивности флуоресценции клеток совокупно по всей суспензии при увеличении концентрации специфических антител не зависит от количества клеток. 3. Абсолютные значения средней интенсивности специфической флуоресценции клеток и количество клеток за областью флуоресценции изотипического контроля зависят от соотношения количество клеток/концентрация моноклональных антител. Заключение. 1. Pgp экспрессирован практически во всех клетках Jurkat. 2. По уровню экспрессии Pgp культура клеток Jurkat достаточно однородна и стабильна в разных пассажах. 3. Клетки Jurkat могут быть использованы в качестве тест-культуры при оценке активности коммерческих антител. 4. При иммунофлуоресцентном анализе экспрессии Pgp в биопсийном материале опухолей человека необходимо использовать не менее трех концентраций специфических антител, не менее трех концентраций клеток в исследуемой суспензии с обязательным параллельным исследованием охарактеризованной клеточной тест-системы (в частности, для изученных моноклональных антител - культуру клеток линии Jurkat). Это позволит не только констатировать факт, но и выраженность экспрессии Pgp, то есть диагностировать тяжесть фенотипа множественной лекарственной резистентности.

линия клеток Т-лимфобластного лейкоза Jurkat, антитела к Pgp, множественная лекарственная резистентность

1. Widmer N. Functional consequence of MDR1 expression on imatinib intracellular concentrations. Blood 2003; 102: 3: 1142-1144.

2. Nagashima S. BCRP/ABCG2 levels account for the resistance to topoisomerase inhibitors and reversal effects by gefitinib in non-small-cell lung cancer. Cancer Chemother Pharmacol 2006; 58: 5: 594-600.

3. Yague E., Armesilla A., Harrison G. et al. P-Glycoprotein (MDR1) expression in leukemic cells is regulated at two distinct steps, mRNA stabilization and translational initiation. J Biol Chem 2003; 278: 12: 10344-10352.

4. Zhao Y., Yu L., Lou F. et al. The clinical significance of lung resistance-related protein gene (lrp), multidrug resistance-associated protein gene(mrp) and mdr-1/p170 expression in acute leukemia. Zhonghua Nei Ke Za Zhi 1999; 38: 11: 760-763.

5. Schwarzenbach H. A diagnostic tool for monitoring multidrug resistance expression in human tumor tissues. Anal Biochem 2002; 308: 1: 26-33.

6. Beck W., Grogan T., Willman C. et al. Methods to detect P-glycoprotein-associated multidrug resistance in patients' tumors: consensus recommendations. Cancer Res 1996; 56: 13: 3010-3020.

7. Zhang H., Zhang W., Li F. Prognostic significance of MDR-1 P-glycoprotein expression in breast cancer. Journal of Nanjing Medical University 2008; 22: 3: 148-152.